Первый раз в чашке Петри вырастили полностью работающий сфинктер

Микробиология: Лабораторный практикум , страница 20

При посеве «газоном» предварительно расплавленную среду разливают (по 10-12 мл) в стерильные чашки Петри. На застывшую среду посев микроорганизмов производится петлей в виде параллельных штрихов или внесенный материал равномерно распределяют по поверхности среды стерильным шпателем. Посев «газоном» применяют для выделения чистых культур микроорганизмов из одной колонии, а также при изучении внешнего вида колоний разных видов. Указанный способ используется также для учета микроорганизмов в воздухе (метод оседания).

Все посевы помещают в термостат для выращивания. Во избежание попадания на поверхность конденсационной влаги чашки с посевами укладывают в термостат перевернутыми вверх дном.

Для роста и размножения микробов на питательных средах необходимы определенные температурные условия. Дрожжевые и мицелиальные грибы, а также многие сапрофитные бактерии относятся к группе мезофилов, т.е. оптимальной температурой для их развития является 25-30°С. Патогенные микробы лучше растут при температуре 37°С.

Существуют микробы, требующие более низких или более высоких температур для своего развития. Так, например, температурный оптимум психорофилов (холодолюбов) 6-10°С, а температурный оптимум для термофилов достигает 50-60 °С. Все различия в биологии микроорганизмов необходимо учитывать при их культивировании, в связи с чем посевы выращиваются в термостатах, который представляют собой шкафы, где поддерживаются соответствующая постоянная температура с помощью специальных терморегуляторов.

Для определения количества микроорганизмов в единице массы (в 1г.) любого продукта, непосредственно в колбу Эрленмейера со 100 мл. стерильной водопроводной воды берут навеску продукта массой от 5 до 10 г. (взвешивают на технических весах с точностью до 1 г.). Затем производят смыв путем взбалтывания пробы в колбе в течение 10 мин. горизонтальными, кругообразными движениями (при этом нельзя смачивать ватную пробку). Получаем 1-ое разведение количества микроорганизмов 1:100. Далее осуществляется разведение путем разбавления полученного смыва в 1000, 10000 и более раз стерильной водой. Для этой цели берут несколько пробирок с 9 мл. стерильной воды в каждой. Стерильной пипеткой вносят 1 мл смыва из колбы в первую пробирку и тщательно перемешивают. Получают разведение 1:1000 из первой пробирки той же пипеткой переносят 1 мл во вторую и получают разведение 1:10 000 и т.д.

Из полученных разведений делают посев по 1 мл. в две стерильные, заранее подписанные чашки Петри. Схема разведений, посев и разливка агара в чашки представлены на рис. 15. следует отметить, что чем больше взято пробирок для разведений, тем больше будет ошибка в конечном подсчете количества микроорганизмов в 1 г. продукт. Внесенный в чашки материал (1 мл смыва) заливают соответствующей, предварительно расплавленной и охлажденной до t 40-45°С, питательной средой. Одну из двух чашек заливают МПА – для вырвщивания колоний бактерий, другую – СА – для выращивания грибов. После застывания среды перевернутые чашки помещают в термостат при t = 28-30° на 48-72 часа. Выросшие на агаре колонии подсчитывают со стороны дна чашки. При этом условно считается, что каждая колония развилась из отдельной микробной клетки. каждую отсчитанную колонию помечают, нанося на ней чернилами точку. Разведение и посев считаются правильно выбранными, если в чашке выросло от 100 до 500 колоний бактерий и от 20 до 50 колоний грибов.

Чашки, в которых выросло менее 10 колоний бактерий и менее 5 колоний плесеней – в расчет не принимаются. Подсчитав количество колоний на чашке, определяют число микроорганизмов (бактерий и грибов отдельно) в 1г продукта по уравнению: A=(b × c)/d, где А-количество микроорганизмов в 1г продукта; b-число колоний на чашке; c-разведение (1:100; 1:1000 и т.д.); d-навеска продукта (г).

Например, при подсчете на чашке обнаружено 320 колоний, разведение 1000, навеска продукта 5г. Определяем количество микроорганизмов в 1г продукта: (320 × 1000)/5 = 64000 или 6,4 × 10 4 КОЕ/г.

  • АлтГТУ 419
  • АлтГУ 113
  • АмПГУ 296
  • АГТУ 266
  • БИТТУ 794
  • БГТУ «Военмех» 1191
  • БГМУ 172
  • БГТУ 602
  • БГУ 153
  • БГУИР 391
  • БелГУТ 4908
  • БГЭУ 962
  • БНТУ 1070
  • БТЭУ ПК 689
  • БрГУ 179
  • ВНТУ 119
  • ВГУЭС 426
  • ВлГУ 645
  • ВМедА 611
  • ВолгГТУ 235
  • ВНУ им. Даля 166
  • ВЗФЭИ 245
  • ВятГСХА 101
  • ВятГГУ 139
  • ВятГУ 559
  • ГГДСК 171
  • ГомГМК 501
  • ГГМУ 1967
  • ГГТУ им. Сухого 4467
  • ГГУ им. Скорины 1590
  • ГМА им. Макарова 300
  • ДГПУ 159
  • ДальГАУ 279
  • ДВГГУ 134
  • ДВГМУ 409
  • ДВГТУ 936
  • ДВГУПС 305
  • ДВФУ 949
  • ДонГТУ 497
  • ДИТМ МНТУ 109
  • ИвГМА 488
  • ИГХТУ 130
  • ИжГТУ 143
  • КемГППК 171
  • КемГУ 507
  • КГМТУ 269
  • КировАТ 147
  • КГКСЭП 407
  • КГТА им. Дегтярева 174
  • КнАГТУ 2909
  • КрасГАУ 370
  • КрасГМУ 630
  • КГПУ им. Астафьева 133
  • КГТУ (СФУ) 567
  • КГТЭИ (СФУ) 112
  • КПК №2 177
  • КубГТУ 139
  • КубГУ 107
  • КузГПА 182
  • КузГТУ 789
  • МГТУ им. Носова 367
  • МГЭУ им. Сахарова 232
  • МГЭК 249
  • МГПУ 165
  • МАИ 144
  • МАДИ 151
  • МГИУ 1179
  • МГОУ 121
  • МГСУ 330
  • МГУ 273
  • МГУКИ 101
  • МГУПИ 225
  • МГУПС (МИИТ) 636
  • МГУТУ 122
  • МТУСИ 179
  • ХАИ 656
  • ТПУ 454
  • НИУ МЭИ 641
  • НМСУ «Горный» 1701
  • ХПИ 1534
  • НТУУ «КПИ» 212
  • НУК им. Макарова 542
  • НВ 777
  • НГАВТ 362
  • НГАУ 411
  • НГАСУ 817
  • НГМУ 665
  • НГПУ 214
  • НГТУ 4610
  • НГУ 1992
  • НГУЭУ 499
  • НИИ 201
  • ОмГТУ 301
  • ОмГУПС 230
  • СПбПК №4 115
  • ПГУПС 2489
  • ПГПУ им. Короленко 296
  • ПНТУ им. Кондратюка 119
  • РАНХиГС 186
  • РОАТ МИИТ 608
  • РТА 243
  • РГГМУ 118
  • РГПУ им. Герцена 124
  • РГППУ 142
  • РГСУ 162
  • «МАТИ» — РГТУ 121
  • РГУНиГ 260
  • РЭУ им. Плеханова 122
  • РГАТУ им. Соловьёва 219
  • РязГМУ 125
  • РГРТУ 666
  • СамГТУ 130
  • СПбГАСУ 318
  • ИНЖЭКОН 328
  • СПбГИПСР 136
  • СПбГЛТУ им. Кирова 227
  • СПбГМТУ 143
  • СПбГПМУ 147
  • СПбГПУ 1598
  • СПбГТИ (ТУ) 292
  • СПбГТУРП 235
  • СПбГУ 582
  • ГУАП 524
  • СПбГУНиПТ 291
  • СПбГУПТД 438
  • СПбГУСЭ 226
  • СПбГУТ 193
  • СПГУТД 151
  • СПбГУЭФ 145
  • СПбГЭТУ «ЛЭТИ» 380
  • ПИМаш 247
  • НИУ ИТМО 531
  • СГТУ им. Гагарина 114
  • СахГУ 278
  • СЗТУ 484
  • СибАГС 249
  • СибГАУ 462
  • СибГИУ 1655
  • СибГТУ 946
  • СГУПС 1513
  • СибГУТИ 2083
  • СибУПК 377
  • СФУ 2423
  • СНАУ 567
  • СумГУ 768
  • ТРТУ 149
  • ТОГУ 551
  • ТГЭУ 325
  • ТГУ (Томск) 276
  • ТГПУ 181
  • ТулГУ 553
  • УкрГАЖТ 234
  • УлГТУ 536
  • УИПКПРО 123
  • УрГПУ 195
  • УГТУ-УПИ 758
  • УГНТУ 570
  • УГТУ 134
  • ХГАЭП 138
  • ХГАФК 110
  • ХНАГХ 407
  • ХНУВД 512
  • ХНУ им. Каразина 305
  • ХНУРЭ 324
  • ХНЭУ 495
  • ЦПУ 157
  • ЧитГУ 220
  • ЮУрГУ 306

Полный список ВУЗов

Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).

Первый раз в чашке Петри вырастили полностью работающий сфинктер

– ничего не проносить над открытыми ёмкостями и перевёрнутыми пробками;
– не оставлять открытыми дольше, чем это необходимо коробки с типами, банки со средами, пробирки, чашки Петри, культуральные матрасы.

Особенно внимательно относитесь к тем местам инструментов, откуда грязь способна легко проникнуть в среду:

– не прикасайтесь к горлышку рядом с пробкой (удобно использовать крышки из фольги);
– внимательно работайте с алюминиевым пеналом со стерильными пипетками, доставайте из него пипетки только стерильным пинцетом.

При стерилизации автоклавированием и прокаливанием стоит иметь в виду, что

– когда вы достаёте какую либо ёмкость из автоклава воздух в ней горячий. При остывании он сжимается и подсасывает воздух снаружи. Нужно, чтобы этот воздух был не слишком грязным.
– если прокаливается перевёрнутая влажная колба, то водяные пары остаются внутри (молекулярный вес воды меньше, чем воздуха). Когда колба остынет, пар вновь сконденсируется и колба окажется изнутри влажной.

Что делать, если случился “зарост”.

  • Заросшая банка или чашка – это разрыв в стерильной работе. Важно не дать ему распространиться. Правила “локализации” проблемы:
    1. Открывать заросшие ёмкости очень опасно – многие бактериофаги и споры грибов летучи. Нужно не полениться и вылить заросшую среду в туалет и там же сполоснуть банку (если выливать в лабораторную раковину – возможны брызги, а значит – распространение проблемы).
    2. Нужно иметь очень веские причины для продолжения работы с заросшей чашкой. Но даже если такие причины найдутся лучше сделать эту работу как можно более кратковременной. В ЛЮБОМ СЛУЧАЕ НЕ ПОД ЛАМИНАРОМ.
    Читайте также:  На новорязанском шоссе в Жулебино будет открыта эстакада
  • При работе с бактериями возможно (у нас ещё никогда не было) появление на чашке очень крупных (0.5-3cm) бляшек бактериофагов. Это не фаг лямбда, и не M13, а очень опасная лабораторная проблема. Такую чашку нельзя открывать ни в коем случае. Её нужно аккуратно поместить в полиэтиленовый пакет и выбросить (даже если чашка стеклянная), причём лучше на улицу, в контейнер.

    Работа под ламинаром.

  • НЕДОПУСТИМО, чтобы в одном ламинаре проводилась работа с бактериями, дрожжами и клетками высших эукариот. Обычно требуется использовать даже различные комнаты.
  • Если в один и тот же день приходится работать и с бактериями и с дрожжами и с клетками высших эукариот, лучше спланировать день так, чтобы порядок работы был:

    Высшие эукариоты;
    Дрожжи;
    Бактерии.

  • Порядок работы под ламинаром:
    1. протереть внутреннюю поверхность раствором детергента (или 70-100% спиртом);
    2. поместить под ламинар всё, что потребуется для работы за исключением

    а) UV-чувствительных компонентов (обычно ваши клетки),
    б) мусорницы (она слишком грязная для того, чтобы постоянно болтаться под ламинаром, её лучше ставить лишь тогда, когда она действительно нужна);

    5-10′ прожечь UV;

  • непосредственно работа (вначале сделать всё, что можно без присутствия “грязных” компонентов. Убрать всё ненужное. Внести под ламинар “грязные” компоненты (иногда лучше по очереди);
  • по окончании работы вновь протереть ламинар раствором детергента (или 70-100% спиртом), выбросить мусор из мусорницы.
  • Инструменты и их применение.

    Пинцет, платиновая петля, стеклянный шпатель.

    1. обмакнуть в спирт;
    2. сжечь спирт/прокалить инструмент на пламени горелки*;
    3. охладить**;
    4. ( не обязательно ) перед использованием шпателя или петли неплохо на всякий случай прикоснуться ими к поверхности агара (петля –

    30”), чтобы быть уверенным, что они не горячие.

    ________________
    * конечно, можно простерилизовать всю петлю – до пластиковой рукоятки. Но нужно иметь в виду, что массивные металлические части (особенно зажим) остывают медленно и часто разумно ограничиться стерилизацией лишь самой петли (однако, в этом случае и засовывать её в пробирку со средой можно лишь на длину проволочки).
    ** охлаждение металлических инструментов можно ускорить: вновь окунуть раскалённую часть в спирт (но, ВНИМАНИЕ. при этом нужно быть уверенным, что предыдущий спирт действительно выгорел), охладить в нём, а затем быстро пронести над горелкой, лишь бы спирт успел загореться. Спирт сгорит, не успев нагреть инструмент так же сильно, как газовая горелка.

    Деревянные зубочистки можно стерилизовать как автоклавированием, так и прокаливанием при 120 o С. Для выкалывания бактерий можно использовать оба конца (зубочистку держать за середину).

    Очень полезный инструмент. Используется для извлечения стерильных зубочисток из стакана, стерильных пипеток из алюминиевого пенала.

    Существенно более дешёвая альтернатива пластиковым. Главный недостаток – нужно очень внимательно следить за тем, чтобы верхний конец пипетки не имел сколов. Сколы могут очень быстро испортить уплотнители у Pipet pump.

    Используются для распределения бактерий по 22х22сm 2 чашкам. После использования собрать, вымыть детергентом, прополоскать, высушить. Стерилизовать прокаливанием (оптом) или автоклавированием (в полипропиленовых 15ml пробирках порциями по 10-15 шариков).

    Незаменим при работе с резиновыми пробками.

    Очень серьёзный стерилизатор. Даже кратковременное (

    10-20”) облучение губительно для клеток.

    Пластиковые чашки Петри.

  • Любая чашка, с которой Вы работаете, должна быть подписана. Чашки подписываются только снизу (со стороны агара). Причину такого выбора проще всего понять сняв одновременно крышки с двух чашек, подписанных сверху.
  • Можно использовать многократно для работы с любыми бактериями. Вымыть, высушить, протереть 70-100% спиртом, поместить открытыми под UV на

    15-30′. Многие (но не все) линии эукариотических клеток так же допускают многократное использование чашек.

    Пластиковые крышки для бактериальных пробирок.

    Вымыть, высушить, автоклавировать.

    Перед работой помыть, протереть 70% спиртом (100% – сушит кожу). Или одеть перчатки и протирать уже их.

    Особенности работы с эукариотическими клетками.

  • Лучше пользоваться лабораторным халатом, предназначенным только для клеточного блока.
  • Обязательно использовать сменную обувь, а не ту, в которой ходите по улице.
  • Нужно выделить определённые пипетки и инструменты и не использовать их ни для чего, кроме культуральных работ.
  • Для хранения реактивов и сред использовать либо отдельный холодильник, либо отдельную тумбочку в холодной комнате (их мыть – детергентом, а затем протирать либо спиртом, либо раствором формалина).
  • Опасность “заростов” выше в тёплое время года.

    Работа с бактериями.

    С бактериями можно чисто работать “на столе” – без ламинара. Всё, что для этого требуется:

    – чистое, незахламлённое место (важно вовремя выбрасывать всё, что способно зарасти);
    – отсутствие сквозняков или хлопающих поблизости дверей.

  • Выкалывание бактериальных колоний. Для заражения достаточно один раз обмакнуть зубочистку вначале в колонию, а потом в среду. Если вы очень дотошный человек – после того как вы обмакнули зубочистку в колонию, размажьте налипшие бактерии по стенке пробирки (их видно), затем наклоните пробирку так, чтобы среда дошла до бактериального пятнышка и, действуя той же зубочисткой как скребком, соскоблите пятно в среду.
  • Если предстоит высеять несколько штаммов бактерий с различной устойчивостью к антибиотикам стоит работать с ними по очереди, в порядке возрастания устойчивости (например: вначале высев на среду без антибиотиков, затем только с ампициллином, и в конце – с ампициллин/тетрациклином).

    Бактериальные чашки Петри.

    Обычно чашка подписывается два раза. Первый раз при заливке:

    (1) среда,
    (2) антибиотики и другие добавки (обычные сокращения – смотри таблицу),
    (3) дата (число и месяц).

    Второй раз при высеве бактерий:

    (4) название плазмиды или библиотеки,
    (5) опять дата.

    среда M9M9ХлорамфениколCm, Cam
    среда LBLBСмесь антибиотиков “GE”GE
    среда SOBSOBАмпициллинA, Amp.
    среда SOCSOCTetracyclineT, Tet.
    среда NZYNZYIPTGI
    среда YENBYENBX-GalX
    среда 2YT2YTГлюкозаGlu
    Terrific BrothTBМальтозаM
    ThiamineThi
    CarbenicillinCb
  • Заливка чашек (на чашку диаметром 8см требуется 15-20ml агара):
    1. подписать чашки;
    2. агар довести до кипения и кипятить 0.5-1′ (для того, чтобы расплавились маленькие кусочки агара, которые могут при остывании выступать как центры “кристаллизации”);
    3. остудить (лучше с покачиванием) до

    50-60 o С (банку с такой температурой можно держать в руке 1-2′);

    если заливается немного чашек:

    * раскапать по чашкам соответствующие антибиотики и добавки (но не X-Gal, так как DMFA быстро растворяет полистирен; его вносить прямо в расплавленный агар сразу после заливки.),
    * заливать чашки “по одной” (вылить 15-20ml агара (на глаз), смешивать 30-60”);

    если заливается много чашек:

    * добавить необходимое количество антибиотиков и добавок прямо в банку, смешать,
    * разлить по чашкам;

  • после заливки следует оставить чашки на 1.5-2h под работающим ламинаром (или, если ламинара нет – в термостате на 37 o С вверх дном, чуть приоткрыв) чтобы агар подсох, иначе (i) после хранения в чашке будет полно влаги, (ii) сложно будет втереть шпателем бактерии (чашка всё время будет мокрой);
  • замотать парафильмом и хранить перевернув

    * чашки без антибиотика – NT, в течении года,
    * чашки с антибиотиком – +4 o С, в течении полутора/двух недель;

    На 8см чашке можно растереть шпателем

    200µl бактериальной суспензии (однако удобнее не превышать 100µl). Растирать нужно только пока поверхность чашки влажная (дальше шпатель начнёт драть агар). Чашки и хранятся, и инкубируются при 37 o С вверх дном.

    Колбы и пробирки.

  • Должны быть подписаны (название плазмиды, дата). Культуру бактерий в пробирке можно хранить в холодной комнате 1-2 месяца. Допустимые количества среды для посуды различной ёмкости (превышать эту ёмкость просто нет смысла, так как из-за плохой аэрации получится даже меньший выход бактерий):
    16ml стеклянная пробирка3-5ml
    100ml коническая колба5-25ml
    250ml коническая колба20-100ml
    500ml коническая колба50-200ml
    1l коническая колба100-400ml
    2l коническая колба300-600ml
  • Пробирки устанавливаются в качалке под углом

    45 o . Для хорошей аэрации нужно, чтобы крышка колбы позволяла воздуху проникать в колбу.

  • Очень удобно, если у конической колбы в нижней части есть 2-3 вдавливания. В этом случае среда перемешивается и насыщается кислородом значительно эффективнее.
  • Желудок вырастили в чашке Петри

    Ученым из Медицинского центра детского госпиталя в Цинциннати (США) впервые удалось получить из человеческих плюрипотентных стволовых клеток миниатюрный желудок, диаметр которого составляет всего примерно 3 мм.

    Как говорит ведущий автор исследования Джеймс Уэллс (James Wells), в будущем эта технология поможет создавать новые ткани и органы для лечения людей с различными заболеваниями желудка, включая врожденные генетические нарушения и рак. Правда, пока до этого далеко. Но уже в настоящее время такой желудок может стать прекрасной моделью для изучения многих заболеваний, а также может использоваться для разработки новых лекарств.

    «До настоящего времени не удавалось получить клетки желудка из человеческих плюрипотентных стволовых клеток. Нам впервые удалось это сделать. Также нам удалось понять, как заставить эти клетки сформировать трехмерную ткань, которая выполняет все функции настоящего желудка», – говорит Уэллс.

    Как объясняют ученые, чтобы понять, как превратить плюрипотентные стволовые клетки человека (клетки, которые дают начало многим специализированным клеткам и тканям) в клетки желудка, они выяснили, как желудок формируется у эмбриона. Они обнаружили несколько компонентов, которые действуют на клетки эмбриона, благодаря которым и формируется этот орган. Этими компонентами они обработали плюрипотентные стволовые клетки для превращения их в желудок. Для такого превращения ученые использовали факторы роста фибробластов, сигнальный путь Wnt (он регулирует развитие эмбриона), группу белков BMP, эпидермальный фактор роста и ретиноевую кислоту.

    Примерно через месяц после таких манипуляций в чашке Петри из плюрипотентных стволовых клеток сформировался желудочный органоид. Так ученые назвали этот крошечный орган, имеющий диаметр всего примерно 3 мм.

    Затем, они решили выяснить, как он будет реагировать на бактерию Helicobacter pylori, которую современная медицина считает главной причиной развития язвы желудка.

    По словам ученых, их удивило то, как быстро эта бактерия поражала эпителий желудка: уже через 24 часа там стали происходить биохимические изменения.

    По словам Уэллса, их миниатюрный желудок может стать и моделью для изучения метаболического синдрома и ожирения. До настоящего времени эти состояния было сложно изучать, поскольку для этого не было адекватных моделей.

    Результаты исследований ученых о выращивании миниатюрного желудка опубликованы в свежем выпуске журнала Nature.

    Совсем недавно Уэллсу и его коллегам удалось совершить еще одно открытие в области клеточных технологий, которое вносит большой вклад в развитие регенеративной медицины.

    Ученые вырастили из клеток кожи человека кусочек ткани кишечника. Вначале они получили индуцированные плюрипотентные стволовые клетки, а затем их уже превратили в клетки и ткани кишечника. Им также впервые удалось имплантировать эту ткань в почку мышей, где сформировался полноценный работающий кишечник. О своем достижении ученые сообщили на прошлой неделе в журнале Nature Medicine.

    Вообще клеточные технологии продвинулись очень далеко – биоинженеры уже умеют выращивать полноценные работающие органы.

    Недавно шотландские ученые впервые вырастили из клеток-фибробластов мыши работающий орган – тимус или вилочковую железу (важнейший орган иммунной системы). Когда этот тимус подсадили к животным в почку, оказалось, что он прекрасно работает и выполняет все необходимые функции.

    Ученым из Массачусетского технологического института удалось вырастить работающую человеческую печень в организме мыши.

    В начале этого года ученые из Техасского университета сообщили о том, что им удалось вырастить человеческие легкие. Правда, пока не совсем понятно, смогут ли они нормально работать.

    Также, научились ученые выращивать из плюрипотентных стволовых клеток человека и сетчатку глаза, способную «видеть».

    Выращивание бактерий в чашке Петри

    Примерное время чтения статьи — 5 минут

    Каждый из нас задумывался о том, сколько же бактерий обитает вокруг нас. Они есть везде, начиная с рук и заканчивая любыми предметами, которые используются человеком систематически. Чтобы больше узнать об этих организмах, можно воспользоваться методом, который позволит увидеть весь мир бактерий, буквально во всех его красках.
    Для того чтобы выращивание в чашке Петри прошло правильно, в ней должна быть создана благоприятная среда. Поэтому заранее нужно подготовить все необходимое:

    • Бульон (мясо – 50 г, вода – 0,5 л, агар – 1 пакетик (растительный порошок, который делается из водорослей))
    • Чашка Петри – от 5 до 10 штук
    • Термометр
    • Холодильник
    • Ватные палочки
    • Маска и перчатки
    • Раствор хлора

    Создание всех необходимых условий

    Сначала нужно приготовить питательный бульон, в котором бактерия сможет расти и развиваться. Для этого нужно сварить мясо, желательно, проваривать его, как можно дольше, чтобы получить хороший навар. Далее в него добавляется агар: на каждые 60 мл жидкости — 1,2 г. Все смешать и разогреть до полного растворения в микроволновке. Затем остудить. Для того чтобы подготовить чашку Петри достаточно будет простерилизовать ее при помощи кипятка. Но стоит помнить, что это лучше делать возле включенной газовой горелки, с целью предотвращения попадания бактерий из воздуха. Только в таком случаи можно считать, что опыт пройдет «чисто». В стерильную чашку заливается полученная жидкость так, чтобы она лишь немного покрывала дно. После закройте емкость верхней чашкой и аккуратно поставьте в холодильник, обращая кверху нижнюю половинку, для избегания капель конденсата. Ждать нужно до образования желеобразной массы. По итогу получается чашка Петри с питательной средой в домашних условиях.

    Заселение бактерий

    Необходимо достать ранее подготовленные чашки Петри из холодильника и дать им время нагреться до температуры комнаты. Чтобы вырастить бактерии «со своих рук» нужно поочередно прикоснуться пальцами к имеющейся питательной среде. Но делать это нужно крайне аккуратно, для сбережения целой поверхности. В конце очень быстро закрыть емкость верхней чашкой. Промаркировать и оставить в теплом месте. Необходимое условие – это поддержание температуры. Для развития бактерий подойдет +37 градусов. В определении самого подходящего места в доме поможет термометр. Для «заселения бактерий» можно использовать крахмал, который есть в обычном картофеле. Необходимо натереть картофель (20 г) и перемешать с агаром (4 г), а также для лучшего эффекта добавить глюкозу (2 г). Полученная каша кипятится в мерном стаканчике. Образовавшаяся жидкость сливается в чашку Петри, а затем оставляется подсыхать. Стерильной ватной палочкой протираются поверхности, где видны бактерии, которые потом переносятся в подготовленную питательную среду, с целью их дальнейшего развития. Определить, что за колония микроорганизмов развилась в чашке Петри возможно при помощи многочисленных способов. Каждая выделяемая культура имеет свои особенности. В домашних условиях ту или иную колонию бактерий можно идентифицировать по форме и определенному цвету.

    Утилизация материалов

    По окончанию эксперимента, необходимо правильно избавиться от выращенных микроорганизмов:

    • Для своей защиты нужно надеть перчатки и, по возможности, маску;
    • Чашки Петри залить раствором хлора и не трогать несколько минут;
    • Вылить содержимое, промытьчашкиисложивихвполиэтиленовыйпакет, выкинуть в мусорное ведро.

    Никогда нельзя забывать, что самостоятельно выращивать микроорганизмы нужно крайне осторожно. Ни в коем случае, нельзя задействовать какие-либо биологические жидкости, такие как слюна и тому подобные. Так как это может вызвать серьезные последствия для здоровья.

    Статьи

    Как вырастить колонии бактерий в чашке Петри в домашних условиях

    У Вас появился инвертированный биологический микроскоп Эврика 40х-320х! Вы изучили под ним воду из канавы, воду из вазы с букетом цветов… Вы посмотрели все, что можно было быстро налить в чашечку Петри. Что же теперь? Давайте попробуем провести настоящие научные исследования. От Вас потребуется терпение, время и фантазия.

    Мы вырастим колонии бактерий в чашечке, которая идет в комплекте с микроскопом. Вы можете приобрести несколько чашек, чтобы выращивать несколько разных колоний одновременно. Думаю, Вы будете поражены разнообразием бактерий, которые окружают нас.

    Будьте осторожны! Эти опыты рекомендуются для детей старше 8 лет и только под наблюдением взрослых! Опыты включают использование кипящей воды и хлорки. Взрослый контроль обязателен!

    • Порошок агар-агар. Он продается в продуктовых магазинах в том же отделе, где ванилин, желатин, корица и другие вкусности для выпечки.

    • 1 чайная ложка сахара.

    • Маленькая кастрюлька или ковшик для кипящей смеси.

    • Инкубатор. В качестве инкубатора мы будем использовать какое-нибудь теплое место. Зимой удобно использовать место рядом с обогревателем. А летом, когда батареи выключены, можно использовать место за холодильником.

    Для начала не забываем пригласить взрослого человека присоединиться к нашему опыту. Нам очень потребуется его помощь.

    1. Наливаем воду в кастрюлю (ковшик) и доводим до кипения. Растворяем сахар в этой воде.

    2. Добавляем порошок агар-агар в кипящую воду и перемешиваем в течение минуты, пока он полностью растворится.

    3. Охлаждаем смесь в течение нескольких минут. Во-первых, смесь должна быть еще горячей, чтобы избежать установки желе прямо в кастрюле. А во-вторых, нам необходимо предотвратить загрязнение нашей смеси бактериями из воздуха. Наши домашние условия далеки от стерильности, но мы постараемся избежать лишних загрязнений.

    4. Открываем чашку Петри. И сразу просим взрослого помощника налить на ее дно горячую смесь из кастрюльки. Заранее открывать не надо, чтобы лишние бактерии не мешали нашему опыту.

    5. Накрываем крышкой чашку Петри и убираем ее в холодильник примерно на 4 часа. За это время установится желе.

    6. Теперь пришло время собирать бактерии и выращивать колонии на агар-агаре в чашке Петри.

    Примечание: чашки Петри с застывшим агар-агаром можно хранить в холодильнике в течение 1-2 месяцев перед использованием. Нужно их перевернуть, чтобы конденсат не испортил подготовленную питательную среду.

    7. Бактерии собрать не трудно, потому что они есть повсюду. Берем чистую ватную палочку и проводим ею там, где хотим найти бактерии – на грязной посуде или под ногтями на руках, или на земле, или на ручке двери, или на мобильном телефоне, или на клавиатуре. Потом аккуратно проводим этой палочкой по застывшему агар-агару в чашке Петри.

    8. Закрываем чашки Петри крышками и заклеиваем скотчем. Чтобы не перепутать чашки, наклеиваем на них наклейки с надписями (откуда были собраны бактерии). Переворачиваем и убираем в инкубатор (теплое темное место). Переворачивать нужно для того, чтобы капли, которые могут образоваться на крышке от испарения, не падали на наш объект исследования. Оставляем на несколько дней.

    9. Через несколько дней можно наблюдать под микроскопом, что происходит в чашке Петри. Мы увидим, как начали расти колонии. Раз в день или раз в несколько дней можно проверять, какие происходят изменения.

    10. Хотя бактерии, которые мы собрали дома, вероятно, будут безвредными, предосторожность не помешает. Нам снова потребуется помощь взрослого, поскольку пластмассовую чашку Петри нужно хорошенько вымыть хлорным раствором, и только потом утилизировать. Если у Вас стеклянная чашка Петри, то ее можно использовать повторно после стерилизации. Напомните Вашему взрослому помощнику о необходимости надеть резиновые перчатки. Ни в коем случае не работайте с хлоркой самостоятельно!

    Если опыт не получился с первого раза, не отчаивайтесь. Попросите совета у учителя биологии в школе. Некоторые виды бактерий любят животную среду, и для них нужно добавить в агар-агар питательную среду, например говяжий бульон. Другие бактерии хорошо размножаются на растительно среде, для них можно добавить картофельный отвар.

    Почему это происходит?

    Бактерии настолько малы, что их нельзя увидеть невооруженным глазом. Но если их поместить на питательную среду и создать им комфортные условия для размножения, то каждая бактерия вырастает в колонию из тысячи бактерий. И вот колонию уже можно разглядеть в микроскоп. Вырастить бактерии может оказаться не просто. Поэтому не сдавайтесь, если ваши первые попытки потерпят неудачу. Но когда опыт будет удачным, подсчитайте количество колоний и обратите внимание на различия в цвете, форме и размере. Где Вы обнаружили больше бактерий? Попробуйте в середину растущей колонии добавить капельку дезинфицирующего средства для рук или средство для мытья унитаза. Произойдут ли изменения в росте и форме колонии?

    Лабораторная работа № 9

    Методы и техника культивирования микроорганизмов на питательных средах.

    Теоретические пояснения:

    Микроорганизмы культивируют (выращивают на питательных средах, которые разливают в пробирки, колбы, флаконы, чашки Петри. Посев производят бактериальной петлей (иглой), шпателем, пастеровской или обычной градуированной пипеткой (рис.9).

    Выросшие на поверхности плотных сред изолированные макроскопические скопления биомасс, являющиеся продуктом размножения одной единственной клетки, называемые колониями, представляют собой чистую культуру бактерий, которую, накопив на средах, используют для определения видовой принадлежности микроорганизма.

    Цель работы: изучить основные методы посева

    Рис. 9. а – шпатель Дригальского, б – градуированная пипетка; в – пастеровская пипетка

    Материалы и оборудование: шпатели микробиологические, градуированые пипетки, пастеровские пипетки, петли бактериальные, иглы бактериальные, пробирки со столбиками среды, чашки Петри с питательной средой, культура исследуемого материала, термостат.

    Ход работы:

    Посев бактериальной петлей на скошенную и жидкую среды

    Пробирку с чистой культурой бактерий и стерильной средой берут в левую руку и держат пальцами в наклонном положении так, чтобы их содержимое не проливалось. В правую руку, как писчее перо, берут петлю и в вертикальном положении стерилизуют в пламени горелки. Пробки из пробирок вынимают одновременно, зажимают их между мизинцем и ладонью правой руки и тотчас же обжигают края открытых пробирок. Прокаленную петлю вводят в пробирку, охлаждают, прикасаются к культуре бактерий, быстро переносят ее в пробирку с незасеянной средой, ополаскивая петлю в бульоне или же зигзагообразными движениями распределяют по скощенной поверхности агара (рис.10).

    Рис. 10. Посев материала бактериальной петлей на скошенную среду

    Петлю извлекают, обжигают края пробирок и закрывают их проведенными через пламя пробками, затем бактериальную петлю стерилизуют, пробирки ставят в штатив.

    Столбики полутвердых сред, мясопептонной желатины насквозь прокалываются иглой или петлей, держа пробирки дном вверх (рис.11). Посев применяют для выращивания бактерий-анаэробов, хранения культур, выявления протеолитических свойств.

    Рис. 11. Посев материала уколом в столбик среды

    Посев градуированной или пастеровской пипеткой

    Пробирки держат под небольшим углом, градуированную или пастеровскую пипетку проводят сквозь пламя и, сняв пробки, опускают в пробирку, затем набирают определенное количество материала, переносят и выдувают его в питательную среду. Пробирки закрывают, а пипетки помещают в дезинфицирующий раствор.

    Посев в чашки Петри с плотной питательной средой

    Плотные питательные среды, например мясопептонный агар, разливают в чашки следующим образом: флакон (пробирку) с расплавленной средой берут в правую руку, левой вынимают пробку, обжигают горлышко. Большим и указательным пальцами левой руки приподнимают крышку чашки Петри и, не касаясь ее краев, вводят под нее горлышко, наливая 15–20 мл среды. Быстро закрывают флакон и крышку. Чашку Петри слегка покачивают для равномерного распределения среды и оставляют для застывания. Затем переносят ее в термостат, переворачивают вверх дном, снимают крышку и подсушивают в таком положении 15–20 мин.

    Шпатели готовят из стеклянных палочек толщиной 4–5 мм, согнутых в виде треугольника. Стерилизуют их завернутыми в бумагу в сухожаровом шкафу, а также сжиганием спирта после предварительного смачивания им. Засевают шпателем каплю материала или взвеси микробов, внесенных на пластинчатую среду, распределяя ее круговыми движениями по всей поверхности, держа левой рукой крышку чашки Петри приоткрытой (рис. 12). Таким же образом, тем же шпателем засеваются поочередно вторая и третья чашки, после чего его погружают в банку с дезинфицирующим раствором.

    Рис. 12. Посев шпателем на питательную среду в чашке Петри

    Чашки переворачивают, надписывают и ставят в термостат вверх дном чтобы избежать размывания растущих колоний на среде капельками конденсационной воды, в большом количестве скапливающимися на внутренней поверхности крышки при обычном ее положении.

    Посев бактериальной петлей

    Исследуемую жидкость набирают петлей и, не прикасаясь к стенке пробирки, удаляют излишнее ее количество. Чашку Петри с агаризованной средой помещают на столе вверх дном. Донную часть чашки держат левой рукой вертикально, петледержатель – большим и указательным пальцами правой руки и легкими движениями наносят жидкость параллельными штрихами по всему диаметру поверхности среды.

    Вопросы для самоконтроля:

    1. Какие выделяют основные методы посева микроорганизмов?

    2. В чем преимущества посева микроорганизмов градуированной пипеткой?

    3. Как осуществляют посев шпателем Дригальского?

    4. Какой метод посева используют для культивирования анаэробных микроорганизмов?

    Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

    Лучшие изречения: На стипендию можно купить что-нибудь, но не больше. 9307 – | 7380 – или читать все.

    Читайте также:  Как сделать дом красивым и уютным своими руками
    Ссылка на основную публикацию